簡單介紹下細胞爬片的使用步驟 細胞爬片步驟
(1)儲存液:1:10稀釋液可以保存在4℃里,三個月內仍然可以使用。稀釋、儲存和吸取多聚賴氨酸要使用塑料制品。
工作液:0.1%(w/v)PLL,用移液槍吸取0.3ml PLL+3ml無菌去離子水,混勻放于10ml無菌塑料離心管中。封口模密封后4℃存放。
(2)無菌處理:PLL不可以高溫消毒,故應過濾除菌分裝于無菌處理的細胞凍存管內,1ml/管,封口模密封,4℃保存。另外,準備無菌去離子水50ml。
細胞爬片方法與技巧
爬片的準備:
1、爬片可用一般的蓋玻片,也可用爬片;
2、應用蓋玻片,可根據(jù)自己的需要剪裁成合適的大小,以備置于6孔板、12孔板或24孔板;
3、將剪裁好的爬片,置于濃硫酸中浸泡并過夜,第二天先用自來水沖洗20遍,再用三蒸水沖洗3遍(個人認為主要目的是沖洗干凈就可以了),放在飯盒或者培養(yǎng)皿(一定是玻璃的哦,要不然就„„)中烘干后進行高壓消毒。
培養(yǎng)板的準備:
1、泡酸過夜
2、沖洗,烘干(1、2步驟與前大致相同)
3、放入超凈工作臺用紫外線照1~2小時就可以用了(在照之前可以將爬片一并放入,若細胞貼壁能力不強,可經多聚賴氨酸浸片后放入。貼壁能力強的話,就可以省略了,進行紫外線消毒)
注:此步自己的經驗是爬片可以先浸入消毒后的PBS內,緊接著放入培養(yǎng)板內。目的:
浸過PBS的爬片依靠表面的液體,可以用培養(yǎng)板孔底貼和緊密,以利于細胞長到爬片上。(自己剛開始做的時候,經常就是細胞全都長在了爬片與培養(yǎng)板之間,爬片上細胞罕見。)
細胞爬片:
1、胰酶消化細胞后計數(shù)
2、根據(jù)自己的需要選擇合適的細胞密度種入培養(yǎng)板內即可
3、第二天即可進行干預措施